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比濁法又稱濁度測定法。濁度法系利用檢測鱟試劑與內毒素反應過程中的濁度變化而測定內毒素含量的方法。
Teller等首先報導將鱟試劑與內毒素作用后,可產生凝膠從而使液體呈混濁,其濁度與內毒素在一定條件下(內毒素濃度20~100pg/ ml)呈線性關系。此法有如下優點①減少了鱟試劑的用量,②快速,③操作簡便,④半自動化。
本試驗的方法是:將已適當稀釋后的鱟試劑與處理后的被檢標本各0.1ml加入微孔中,振顫器振動60秒鐘,使兩者充分混勻。放置37℃60分鐘,然后取出在分光光度計360~380nm處讀取光密度值(OD)。另以系列稀釋的標準內毒素作陽性對照,并將其OD值與內毒素量間的關系描成標準曲線。比較試驗管與對照管的OD值,即可知道標本中內毒素的含量。
在操作中,孵育的時間是至關重要的,因為隨著時間的延長,濁度亦將增加,一般孵育1小時即可終止其反應。即使在室溫中,如時間過長濁度亦會增加,因此孵育后應立即讀取OD值。讀取OD值時,應每隔1分鐘進行一次,共四次,取其平均值,變異系數應不超過1%。
另外,某些注射藥品及放射性藥物本身帶有顏色或濁度時,必須減去標本本身的OD值。