動態顯色法鱟試劑兼有動態濁度法鱟試劑和終點法顯色基質鱟試劑的優點。不需要凝固蛋白原形成凝膠,根據顯色反應來準確定量細菌內毒素,抗干擾能力強,特別適用于生物樣本的檢測,如疫苗、抗體、蛋白質、核酸、臨床樣本等的內毒素分析。
動態顯色法鱟試劑的質量主要表現于其靈敏度、自凝時間與成膠狀態三個方面:靈敏度穩定;自凝時間不低于24h;具有一定的緩沖能力與合適的pH;反應后即形成堅實凝膠,將成膠安瓿翻轉180°而不會被破壞。而質量稍差的鱟試劑存放一定時間后(如半年)其靈敏度可能發生變化,而靈敏度的改變會使測定結果所反映的供試品中內毒素的允許限值發生變化。
動態顯色法鱟試劑在操作過程中要注意以下幾點:
1、實驗室要求潔凈、無塵埃流通;檢驗人員同時注意衛生的保持。在整個使用操作過程中應防止微生物的污染,例如空氣的流動,人員的口沫、汗液污染等。
2、鱟試劑開啟、溶解和配制時應盡量避免將安瓿外瓶壁臟物、瓶壁碎片、砂輪鋸屑等異物混入鱟試劑中,避免鱟試劑外損。
3、鱟試劑中含有多種蛋白質,用力振搖會產生氣泡,一旦起泡難以消除,而影響檢測的準確性,所以在整個操作過程中都要輕力以避免因過分震動而引起的誤差。
4、量取和加樣反應物時,一定要加到試管底部接近鱟試液而不接觸鱟試液的管壁處。
5、生成凝膠的最適pH值為6~8,對于氯化鈉注射液、葡萄糖注射液(5%,10%)等注射液,不需考慮供試液的pH值,而檢查其他制劑時,尤其是一些本身緩沖能力較強或偏酸、堿的供試品,應考慮供試品的pH值。
6、使用時要嚴格控制溫度和時間。當鱟試劑一加入內毒素及樣品混合液中時反應已開始,并在一定的溫度范圍內,反應溫度越高,反應速率越大;保溫時間的增長,也會提高鱟試劑的靈敏度,增加假陽性的發生,導致較大誤差。因此,要注意控制溫度的變化和保溫時間。
7、保持實驗器具的潔凈。每次檢驗完畢,應及時將玻璃器具充分清洗后于250℃干熱滅菌處理,待烤箱溫度升至設定的溫度后開始計時,干烤至少1h。也可用其他經確證不干擾細菌內毒素的檢查的適宜方法。對于塑料、橡膠等不耐熱器材可用30%雙氧水浸泡4h,用無熱原水沖洗,70℃干燥備用。