三種凝膠法常用方法：試管法、玻片法及毛細吸管法的介紹

凝膠法常用的方法有三種，即試管法、玻片法及毛細吸管法。

1. 試管法

將等量的被檢樣品與鱟試劑加入試管，混勻，放入水浴中讓其充分反應，然后取出觀察凝膠形成的情況。實驗時共需作四種試管，即試驗管、陽性對照管、陰性對照管及陰性抑制對照管。

試驗管：取標本0.1ml+鱟試劑0.1ml。一般的標本如水、注射液等，實驗前不須加以處理，但血液及腹腔滲出液等實驗前必須加以處理，因為在這些標本中可能會有LT（Limulus test，鱟試劑法）反應的抑制物質。應用的鱟試劑應事前以標準內毒素進行標定，并認為是可用的。

陽性對照管:標準內毒素0.1ml+鱟試劑0.1ml。標準內毒素用前應以WHO標準品標定。所用的內毒素濃度按鱟試劑的敏感性而定，一般為1～5 ng/ ml。

陰性對照管:無熱原水0.1ml+鱟試劑0.1ml。

抑制對照管:標本0.1ml＋標準內毒素0.1ml+鱟試劑0.2ml。

上述四管均放入37℃孵育1～2小時觀察結果。如形成凝膠堅固，試管倒轉180度不變形，則記為（++）；如混濁度和粘滯性明顯增加，呈膠體狀，但傾斜試管時變形，則記為（+）；如液體流動自如，透明無變化或稍混濁，有少量顆粒細絮片狀物，則記為（-）。

如被檢樣品中有抑制物存在，則可將檢品作適當的稀釋或經各種處理以除去抑制物，再次測試。如這些方法無效，亦可采用其它內毒素檢測法，如RT（Rabbit pyrogen test，家兔熱原實驗）法。

2. 玻片法

鑒于試管法耗費鱟試劑量多，結果判定不易標準化，需用時間較長等缺點，Frauch于1974年首先創用了玻片法。將10μl鱟試劑與已處理過的被檢樣品10μl滴于無菌無熱原的玻片上，充分混勻，水平放置37℃30分鐘，取出觀察結果。如標本中含有內毒素，則混合物形成凝膠，倒轉玻片時混合物不流動，觸之較結實。反之則說明樣本中不含內毒素或內毒素含量過低。

Goto等于1977年對此法進行了兩點改進。①增加鱟試劑及樣品的量，所用量各為20μl。由于Frauch法僅用10μl的鱟試劑及10μl的被檢標本，量太少，且形成凝膠后其體積更小，不易判斷結果。故各增加鱟試劑及被檢標本量1倍，這樣結果判定更正確、容易些。②使用不含硅的玻片。由于硅玻璃組成的玻片，滴加在其上的液體可向四周擴散，而顯得不規則。不含硅的玻片可使滴加在其上的液體保持穩定，不向四周擴散，這樣，為結果的判斷提取了方便。

3. 毛細吸管法

此法由瑞典學者Gardi于1980年首先創用。將10μl被檢標與10μl鱟試劑滴于無菌無熱原的載玻片上，充分混勻，然后以毛細吸管吸入其內（一般為2/3的高度），水平37℃孵育45-60分鐘，取出毛細吸管，再浸入溴酚染料中2～3秒鐘，取出即可判斷結果。如染料能進入毛細吸管，則說明樣品中無內毒素或所含的內毒素量低于鱟試劑檢測的敏感度記為（-）；如有堅固凝膠形成以致染色不能浸入，即說明樣本含有內毒素，記為（+）。此法敏感性高、操作簡便、所需試劑量少、孵育時間短，結果判斷較客觀。

我們實驗室于1982-1983年間應用毛細吸管微量測定法對臨床的多種標本進行了內毒素檢測，結果較為滿意，認為此法值得在臨床上廣泛推廣。

目前，日本已有專門的內毒素微量檢測管出售，這種毛細吸管內已裝有微量的凍干鱟試劑，只需將此管插入液相標本，取出孵育一定的時間后即能判斷結果。